鍊(liàn)黴素(Streptomycin,STR)是(shì)一(yī)種(zhǒng)氨基糖(táng)苷類(lèi)抗生(shēng)素,如果(guǒ)使用(yòng)不(bù)當或(huò)停藥时(shí)間(jiān)短,鍊(liàn)黴素可(kě)能(néng)会(huì)超量(liàng)殘留于(yú)動(dòng)物(wù)源食品中(zhōng)。食品中(zhōng)低(dī)浓度(dù)鍊(liàn)黴素殘留会(huì)引起(qǐ)过(guò)敏,損傷腸(cháng)內(nèi)有益菌群(qún),而(ér)高(gāo)浓度(dù)鍊(liàn)黴素会(huì)引起(qǐ)耳(ěr)和(hé)腎中(zhōng)毒,对(duì)过(guò)敏胎兒更(gèng)为(wèi)嚴重(zhòng)。过(guò)去(qù)鍊(liàn)黴素殘留一(yī)般采用(yòng)气(qì)相色(sè)譜法測定(dìng),但此(cǐ)方(fāng)法昂貴又費时(shí),本(běn)试劑盒是(shì)應(yìng)用(yòng)ELISA技术研發(fà)的(de)藥物(wù)殘留檢測产品,與(yǔ)儀器分(fēn)析技术相比具有快(kuài)速、簡便、準确和(hé)靈敏度(dù)高(gāo)等优點(diǎn),操作(zuò)时(shí)間(jiān)需45分(fēn)鐘(zhōng),能(néng)減少(shǎo)工作(zuò)強(qiáng)度(dù)和(hé)操作(zuò)誤差。
1、将所需试劑從冷(lěng)藏环(huán)境中(zhōng)取(qǔ)出(chū),置于(yú)室(shì)温(wēn)(20~25℃)平衡30min以(yǐ)上(shàng),注意(yì)每種(zhǒng)液體(tǐ)试劑使用(yòng)前(qián)均須搖勻。
2、取(qǔ)出(chū)需要(yào)數量(liàng)的(de)微孔闆,将不(bù)用(yòng)的(de)微孔闆放(fàng)進(jìn)原锡(xī)箔袋(dài)中(zhōng)並(bìng)且(qiě)與(yǔ)提(tí)供的(de)干(gàn)燥劑一(yī)起(qǐ)重(zhòng)新(xīn)密封(fēng),保存于(yú)2~8℃。切(qiè)勿冷(lěng)凍。
3、洗涤液在(zài)使用(yòng)前(qián)也(yě)需回(huí)温(wēn)。
4、編号(hào):将样本(běn)和(hé)标(biāo)準品对(duì)應(yìng)微孔按序編号(hào),每个(gè)样本(běn)和(hé)标(biāo)準品做2孔平行,並(bìng)记录标(biāo)準孔和(hé)样本(běn)孔所在(zài)的(de)位(wèi)置。
5、加标(biāo)準品/样本(běn):加入(rù)标(biāo)準品或(huò)样本(běn)100µL/孔到(dào)对(duì)應(yìng)的(de)微孔中(zhōng),再加入(rù)鍊(liàn)黴素酶标(biāo)物(wù)50µL/孔,再加入(rù)鍊(liàn)黴素抗试劑50µL/孔輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻,用(yòng)蓋闆膜蓋闆後(hòu)置于(yú)25℃避光(guāng)环(huán)境中(zhōng)反(fǎn)應(yìng)30min。
6、洗闆:小心(xīn)揭開(kāi)蓋闆膜,将孔內(nèi)液體(tǐ)甩干(gàn),用(yòng)洗涤液250µL/孔,充分(fēn)洗涤4~5次(cì),每次(cì)間(jiān)隔10s,在(zài)吸水(shuǐ)紙(zhǐ)上(shàng)拍干(gàn)(拍干(gàn)後(hòu)未被(bèi)清(qīng)除的(de)气(qì)泡可(kě)用(yòng)未使用(yòng)过(guò)的(de)槍头(tóu)戳破)。
7、顯色(sè):加入(rù)底物(wù)液A液50µL/孔,再加入(rù)底物(wù)液B液50µL/孔,輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻,用(yòng)蓋闆膜蓋闆後(hòu)置于(yú)25℃避光(guāng)环(huán)境中(zhōng)反(fǎn)應(yìng)15min。
8、測定(dìng):加入(rù)終(zhōng)止液50µL/孔,輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻,設定(dìng)酶标(biāo)儀于(yú)450nm处(建議用(yòng)双(shuāng)波(bō)长(cháng)450/630nm檢測,請在(zài)5min內(nèi)读完數據(jù)),測定(dìng)每孔OD值(若無酶标(biāo)儀,則不(bù)加終(zhōng)止液用(yòng)目測法可(kě)進(jìn)行判定(dìng))。