我(wǒ)司已經(jīng)建立凉(liáng)皮(pí)样品中(zhōng)米(mǐ)酵菌酸(suān)的(de)分(fēn)析方(fāng)法,根(gēn)據(jù)客戶的(de)要(yào)求，美(měi)正(zhèng)生(shēng)物(wù)開(kāi)發(fà)建立银(yín)耳(ěr)样品中(zhōng)米(mǐ)酵菌酸(suān)的(de)分(fēn)析方(fāng)法。

01實(shí)验部(bù)分(fēn)

儀器、试劑與(yǔ)材料

主(zhǔ)要(yào)儀器設備

PerkinElmer QSight 液相色(sè)譜串联質(zhì)譜儀。

试劑材料

甲醇、甲酸(suān)、乙腈为(wèi)色(sè)譜純，氨水(shuǐ)为(wèi)分(fēn)析純；

甲醇-氨水(shuǐ)溶液：量(liàng)取(qǔ) 800 mL 甲醇，加入(rù) 10 mL 氨水(shuǐ)，用(yòng)水(shuǐ)稀釋並(bìng)定(dìng)容至(zhì) 1000 mL，混勻；

2%甲酸(suān)甲醇溶液：吸取(qǔ) 2 mL 甲酸(suān)，用(yòng)甲醇稀釋至(zhì) 100 mL ，混勻；

0. 1%甲酸(suān)水(shuǐ)溶液：吸取(qǔ) 1 mL 甲酸(suān)，用(yòng)水(shuǐ)稀釋至(zhì) 100 mL ，混勻；

50%乙腈水(shuǐ)溶液：吸取(qǔ) 50 mL 乙腈，用(yòng)水(shuǐ)稀釋至(zhì) 100 mL ，混勻；

PolyPlus MAX：60 mg/3 mL，P/N：CSS0025。

样本(běn)制備

样品提(tí)取(qǔ)

稱取(qǔ)银(yín)耳(ěr)试样 2.5 g 置于(yú) 50 mL 离心(xīn)管(guǎn)中(zhōng)，加入(rù) 15 mL  甲醇-氨水(shuǐ)溶液，渦旋混勻，室(shì)温(wēn)下(xià) 置于(yú)暗(àn)处浸泡 1 h，超聲提(tí)取(qǔ) 30 min，8000 r/min 离心(xīn) 5 min，取(qǔ)上(shàng)清(qīng)液至(zhì) 25 mL 刻度(dù)离心(xīn)管(guǎn)中(zhōng)， 殘渣加入(rù) 10 mL 甲醇-氨水(shuǐ)溶液重(zhòng)複提(tí)取(qǔ)一(yī)次(cì)，合並(bìng)提(tí)取(qǔ)液，用(yòng)甲醇-氨水(shuǐ)溶液定(dìng)容至(zhì) 25 mL ， 混勻，準确移取(qǔ) 5 mL 上(shàng)清(qīng)液（若有少(shǎo)許沉澱可(kě)离心(xīn)後(hòu)再取(qǔ)上(shàng)清(qīng)，否則会(huì)影響淨化(huà)时(shí)过(guò)柱速度(dù)），

待淨化(huà)。

样品淨化(huà)

将待淨化(huà)液全(quán)部(bù)轉(zhuǎn)移到(dào)經(jīng) 5 mL 甲醇和(hé) 5 mL 水(shuǐ)活化(huà)平衡的(de)固相萃取(qǔ)柱中(zhōng)，依次(cì)用(yòng) 5 mL 水(shuǐ) 和(hé) 5 mL 甲醇淋洗，棄去(qù)流出(chū)液，抽干(gàn)萃取(qǔ)柱，再用(yòng) 6 mL 2%甲酸(suān)甲醇溶液洗脫，收(shōu)集洗脫液， 于(yú) 40℃水(shuǐ)浴中(zhōng)氮吹至(zhì)干(gàn)，準确加入(rù) 1 mL 50%乙腈水(shuǐ)溶液，渦旋混勻，經(jīng)有機(jī) PTFE 針(zhēn)式滤器

过(guò)滤後(hòu)進(jìn)行 LC-MS/MS 分(fēn)析。

基質(zhì)混合标(biāo)準工作(zuò)溶液配制

取(qǔ)高(gāo)浓度(dù)米(mǐ)酵菌酸(suān)标(biāo)準溶液，用(yòng)空(kōng)白(bái)样品基質(zhì)溶液稀釋成(chéng) 15 ng/mL 、30 ng/mL 和(hé) 125ng/mL 的(de)基質(zhì)混合标(biāo)準工作(zuò)溶液。

色(sè)譜条(tiáo)件(jiàn)

色(sè)譜柱：Kinetex F5 ，2.6 µm ，3.0 × 50 mm；

流動(dòng)相 A：0. 1%甲酸(suān)水(shuǐ)；

流動(dòng)相 B：乙腈；

柱  温(wēn)：40℃;

進(jìn)样量(liàng)：10 µL；

梯(tī)度(dù)洗脫：

液相色(sè)譜梯(tī)度(dù)洗脫条(tiáo)件(jiàn)

質(zhì)譜条(tiáo)件(jiàn)

离子源：ESI- ；霧(wù)化(huà)气(qì)：200；電(diàn)噴霧(wù)電(diàn)壓：-4500 V；离子源温(wēn)度(dù)：275℃; 反(fǎn)吹气(qì)：80；

質(zhì)譜接口(kǒu)温(wēn)度(dù)：280℃; 采集方(fāng)式：多(duō)反(fǎn)應(yìng)監測(MRM)。

質(zhì)譜參數

注：本(běn)實(shí)验中(zhōng)所有离子对(duì)都以(yǐ)第(dì)一(yī)組离子对(duì)作(zuò)为(wèi)定(dìng)量(liàng)离子对(duì)。

02實(shí)验結果(guǒ)

 银(yín)耳(ěr)基質(zhì)加标(biāo)回(huí)收(shōu)實(shí)验結果(guǒ)（n=3）

03實(shí)验譜图

15 ng/mL 米(mǐ)酵菌酸(suān)标(biāo)準工作(zuò)溶液色(sè)譜图

15 ng/mL 米(mǐ)酵菌酸(suān)银(yín)耳(ěr)基質(zhì)混合标(biāo)準工作(zuò)溶液色(sè)譜图

银(yín)耳(ěr)基質(zhì)空(kōng)白(bái)色(sè)譜图

0.03 mg/kg 银(yín)耳(ěr)基質(zhì)加标(biāo)色(sè)譜图

30 ng/mL 米(mǐ)酵菌酸(suān)银(yín)耳(ěr)基質(zhì)混合标(biāo)準工作(zuò)溶液色(sè)譜图

0.06 mg/kg 银(yín)耳(ěr)基質(zhì)加标(biāo)色(sè)譜图

125 ng/mL 米(mǐ)酵菌酸(suān)银(yín)耳(ěr)基質(zhì)混合标(biāo)準工作(zuò)溶液色(sè)譜图

0.25 mg/kg 银(yín)耳(ěr)基質(zhì)加标(biāo)色(sè)譜图

04結論

本(běn)實(shí)验參考 GB 5009.189-2023 建立了银(yín)耳(ěr)中(zhōng)米(mǐ)酵菌酸(suān)的(de)檢測方(fāng)法，並(bìng)結合 LC-MS/MS 分(fēn)别对(duì)加标(biāo)量(liàng)为(wèi)0.03mg/kg、0.06mg/kg和(hé)0.25mg/kg的(de)银(yín)耳(ěr)样品進(jìn)行了檢測。

結果(guǒ)表(biǎo)明(míng)，使用(yòng) MAX 固相萃取(qǔ)小柱对(duì)银(yín)耳(ěr)基質(zhì)進(jìn)行淨化(huà)，米(mǐ)酵菌酸(suān)回(huí)收(shōu)率均滿足檢測要(yào)求且(qiě)RSD小于(yú)10%。说(shuō)明(míng)該方(fāng)法适用(yòng)银(yín)耳(ěr)中(zhōng)米(mǐ)酵菌酸(suān)的(de)檢測，且(qiě)方(fāng)法穩定(dìng)。