孔雀石(dàn)綠(lǜ)ELISA快(kuài)速檢測试劑盒介紹

孔雀石(dàn)綠(lǜ)在(zài)水(shuǐ)产中(zhōng)曾廣泛應(yìng)用(yòng)作(zuò)为(wèi)抗菌劑和(hé)防真(zhēn)菌劑，特(tè)别是(shì)在(zài)魚蝦養殖業。它(tā)可(kě)以(yǐ)用(yòng)于(yú)治療或(huò)防止魚蝦疾病，並(bìng)促進(jìn)生(shēng)长(cháng)。

然而(ér)，盡管(guǎn)孔雀石(dàn)綠(lǜ)在(zài)水(shuǐ)产業有一(yī)定(dìng)的(de)應(yìng)用(yòng)價值，但由(yóu)于(yú)其(qí)潛在(zài)的(de)危害性(xìng)，許多(duō)國(guó)家(jiā)和(hé)地(dì)區(qū)已經(jīng)禁止或(huò)限制其(qí)使用(yòng)。

孔雀石(dàn)綠(lǜ)屬于(yú)有機(jī)染料，具有強(qiáng)烈的(de)毒性(xìng)。以(yǐ)下(xià)是(shì)一(yī)些(xiē)可(kě)能(néng)的(de)危害：

1. 环(huán)境污染：过(guò)量(liàng)使用(yòng)或(huò)不(bù)當处理(lǐ)孔雀石(dàn)綠(lǜ)的(de)廢水(shuǐ)会(huì)直接排放(fàng)到(dào)水(shuǐ)體(tǐ)中(zhōng)，对(duì)水(shuǐ)生(shēng)生(shēng)物(wù)和(hé)整个(gè)生(shēng)态系(xì)統造成(chéng)污染。

2. 防藥物(wù)殘留：孔雀石(dàn)綠(lǜ)具有持(chí)久性(xìng)和(hé)穩定(dìng)性(xìng)，容易在(zài)水(shuǐ)产中(zhōng)殘留，长(cháng)期(qī)食用(yòng)受污染的(de)水(shuǐ)产品可(kě)能(néng)对(duì)人體(tǐ)健康造成(chéng)潛在(zài)風(fēng)險。

3. 抗藥性(xìng)产生(shēng)：頻繁使用(yòng)孔雀石(dàn)綠(lǜ)可(kě)能(néng)導致(zhì)病原菌产生(shēng)耐藥性(xìng)，对(duì)其(qí)他(tā)藥物(wù)的(de)治療也(yě)产生(shēng)耐藥性(xìng)，使得治療更(gèng)困難。

出(chū)于(yú)对(duì)环(huán)境和(hé)人類(lèi)健康的(de)考慮，越来(lái)越多(duō)的(de)國(guó)家(jiā)和(hé)地(dì)區(qū)已經(jīng)禁止了孔雀石(dàn)綠(lǜ)的(de)使用(yòng)。目前(qián)許多(duō)國(guó)家(jiā)已經(jīng)建立了嚴格的(de)監測體(tǐ)系(xì)，确保水(shuǐ)产品質(zhì)量(liàng)和(hé)安全(quán)。

孔雀石(dàn)綠(lǜ)ELISA快(kuài)速檢測试劑盒原理(lǐ)

采用(yòng)回(huí)接競争ELISA方(fāng)法，在(zài)酸(suān)标(biāo)闆做孔上(shàng)項包(bāo)被(bèi)孔雀 石(dàn)綠(lǜ)抗原，样本(běn)中(zhōng)孔雀石(dàn)綠(lǜ)和(hé)此(cǐ)抗原競争孔雀石(dàn)綠(lǜ)抗體(tǐ)(抗试 劑)，加入(rù)酶标(biāo)二(èr)抗《酶标(biāo)物(wù)〉與(yǔ)孔雀石(dàn)綠(lǜ)抗體(tǐ)相結合，經(jīng) TMB 底物(wù)顯色(sè)，样本(běn)吸光(guāng)值與(yǔ)孔雀石(dàn)綠(lǜ)含量(liàng)呈負相關(guān)，與(yǔ)标(biāo)準曲(qū)線(xiàn)比較再乘以(yǐ)其(qí)对(duì)應(yìng)的(de)稀釋倍數，即可(kě)得出(chū)样本(běn)中(zhōng)孔雀石(dàn)綠(lǜ)的(de)含量(liàng)。

孔雀石(dàn)綠(lǜ)ELISA快(kuài)速檢測试劑盒用(yòng)途

可(kě)定(dìng)性(xìng)、定(dìng)量(liàng)檢測組織魚肉(ròu)、蝦肉(ròu)、水(shuǐ)样中(zhōng)孔雀石(dàn)綠(lǜ)、隐性(xìng)孔雀石(dàn)綠(lǜ)、結品紫和(hé)隐性(xìng)結晶紫的(de)含量(liàng)。

孔雀石(dàn)綠(lǜ)ELISA快(kuài)速檢測试劑盒參數

试劑盒靈敏度(dù)：0.03ppb 

样本(běn)最(zuì)低(dī)檢測限： 

組織——0.1ppb 

水(shuǐ)样——0.3ppb 

回(huí)收(shōu)率： 

組織——90±20% 

水(shuǐ)样——100±20% 

精密度(dù)：试劑盒的(de)變(biàn)异(yì)系(xì)數均小于(yú) 10%

孔雀石(dàn)綠(lǜ)ELISA快(kuài)速檢測试劑盒样本(běn)处理(lǐ)

样本(běn)处理(lǐ)前(qián)須知

• (a) 實(shí)验中(zhōng)必須使用(yòng)一(yī)次(cì)性(xìng)吸头(tóu)，在(zài)吸取(qǔ)不(bù)同(tóng)的(de)试劑时(shí)需更(gèng)換 吸头(tóu)；

• (b)實(shí)验之(zhī)前(qián)須檢查各(gè)種(zhǒng)實(shí)验器具是(shì)否潔淨，必須使用(yòng)潔淨實(shí) 验器具，以(yǐ)避免污染干(gàn)扰實(shí)验結果(guǒ)；

• (c)實(shí)验过(guò)程中(zhōng)【請使用(yòng)紅(hóng)色(sè)记号(hào)笔】進(jìn)行标(biāo)记，勿用(yòng)藍(lán)色(sè)及 黑(hēi)色(sè)记号(hào)笔（其(qí)成(chéng)分(fēn)含有結晶紫與(yǔ)本(běn)试劑盒有交叉反(fǎn)應(yìng)） 進(jìn)行标(biāo)记，以(yǐ)免影響檢測結果(guǒ)；

• (d)未处理(lǐ)的(de)样本(běn)需冷(lěng)凍环(huán)境-20℃保存； (e)处理(lǐ)好(hǎo)的(de)样本(běn)應(yìng)立即用(yòng)于(yú)檢測。

  
  

組織（魚肉(ròu)、蝦肉(ròu)） 

• 用(yòng)均質(zhì)器均質(zhì)样本(běn)； 

• 稱取(qǔ)2.0±0.05g样本(běn)至(zhì)50mL聚苯乙烯离心(xīn)管(guǎn)中(zhōng)，先加入(rù) 2 1mL去(qù)离子水(shuǐ)，再加入(rù)10mL乙腈，振蕩混勻2min；

• 加入(rù)2g样本(běn)提(tí)取(qǔ)劑A，再加入(rù)2g样本(běn)提(tí)取(qǔ)劑B，最(zuì)後(hòu)加入(rù) 1mL样本(běn)提(tí)取(qǔ)液，振蕩混勻3min； 

• 室(shì)温(wēn)4000r/min离心(xīn)5min；

• 取(qǔ)上(shàng)清(qīng)液2mL至(zhì)干(gàn)燥潔淨的(de)离心(xīn)管(guǎn)中(zhōng)，加入(rù)50μL氧化(huà)劑， 用(yòng)移液器吸头(tóu)反(fǎn)複吸打(dǎ)幾(jǐ)次(cì)使氧化(huà)劑分(fēn)散(sàn)【注意(yì)更(gèng)換吸 头(tóu)】，置于(yú)50℃氮气(qì)流下(xià)吹干(gàn)；

• 加入(rù)1mL样本(běn)稀釋液，劇烈振蕩混勻2min； 

• 取(qǔ)50μL用(yòng)于(yú)分(fēn)析。 稀釋倍數：3 倍

  
  

孔雀石(dàn)綠(lǜ)ELISA快(kuài)速檢測试劑盒使用(yòng)步驟

• 将所需试劑從冷(lěng)藏环(huán)境中(zhōng)取(qǔ)出(chū)，置于(yú)室(shì)温(wēn)（20~25℃）平衡30min 以(yǐ)上(shàng)，注意(yì)每種(zhǒng)液體(tǐ)试劑使用(yòng)前(qián)均須搖勻。

• 取(qǔ)出(chū)需要(yào)數量(liàng)的(de)微孔闆，将不(bù)用(yòng)的(de)微孔闆放(fàng)進(jìn)原锡(xī)箔袋(dài)中(zhōng) 並(bìng)且(qiě)與(yǔ)提(tí)供的(de)干(gàn)燥劑一(yī)起(qǐ)重(zhòng)新(xīn)密封(fēng)，保存于(yú) 2～8℃。【切(qiè) 勿冷(lěng)凍】。

• 洗涤液在(zài)使用(yòng)前(qián)也(yě)需回(huí)温(wēn)。

• 編号(hào)：将样本(běn)和(hé)标(biāo)準品对(duì)應(yìng)微孔按序編号(hào)，每个(gè)样本(běn)和(hé)标(biāo)準品做 2 孔平行，並(bìng)记录标(biāo)準孔和(hé)样本(běn)孔所在(zài)的(de)位(wèi)置。

• 加标(biāo)準品/样本(běn)：加入(rù)标(biāo)準品或(huò)样本(běn) 50μL 到(dào)对(duì)應(yìng)的(de)微孔中(zhōng)， 然後(hòu)加入(rù)孔雀石(dàn)綠(lǜ)抗试劑 50μL/孔，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻，用(yòng)蓋 闆膜蓋闆後(hòu)置于(yú) 25℃避光(guāng)环(huán)境中(zhōng)反(fǎn)應(yìng) 15min。

• 洗闆：小心(xīn)揭開(kāi)蓋闆膜，将孔內(nèi)液體(tǐ)甩干(gàn)，用(yòng)洗涤液 250μL/ 孔，充分(fēn)洗涤 4～5 次(cì)，每次(cì)間(jiān)隔 10s，在(zài)吸水(shuǐ)紙(zhǐ)上(shàng)拍干(gàn)（拍干(gàn)後(hòu)未被(bèi)清(qīng)除的(de)气(qì)泡可(kě)用(yòng)未使用(yòng)过(guò)的(de)槍头(tóu)戳破）。

• 加酶标(biāo)物(wù)：加入(rù)孔雀石(dàn)綠(lǜ)酶标(biāo)物(wù) 100μL/孔，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻， 用(yòng)蓋闆膜蓋闆後(hòu)置于(yú) 25℃避光(guāng)环(huán)境中(zhōng)反(fǎn)應(yìng) 15min，然後(hòu)取(qǔ) 出(chū)重(zhòng)複洗闆步驟 6。

• 顯色(sè)：加入(rù)底物(wù)液 A 液 50μL/孔，再加入(rù)底物(wù)液 B 液 50μL/ 孔，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻，用(yòng)蓋闆膜蓋闆後(hòu)置于(yú) 25℃避光(guāng)环(huán)境中(zhōng) 反(fǎn)應(yìng) 15min。

• 測定(dìng)：加入(rù)終(zhōng)止液 50μL/孔，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻，設定(dìng)酶标(biāo)儀 于(yú) 450nm 处（建議用(yòng)双(shuāng)波(bō)长(cháng) 450/630nm 檢測，請在(zài) 5min 內(nèi)读完數據(jù)），測定(dìng)每孔 OD 值。(若無酶标(biāo)儀，則不(bù)加 終(zhōng)止液用(yòng)目測法可(kě)進(jìn)行判定(dìng))。

• 結果(guǒ)判定(dìng) 請使用(yòng)專業分(fēn)析软(ruǎn)件(jiàn)進(jìn)行計(jì)算，更(gèng)便于(yú)大(dà)量(liàng)样本(běn)的(de)準确、

孔雀石(dàn)綠(lǜ)ELISA快(kuài)速檢測试劑盒常見(jiàn)問(wèn)題(tí)

• 试劑及样本(běn)沒(méi)有回(huí)到(dào)室(shì)温(wēn)（20～25℃）会(huì)導致(zhì)所有标(biāo)準的(de) OD 值偏低(dī)。

• 在(zài)洗闆过(guò)程中(zhōng)如果(guǒ)出(chū)現(xiàn)闆孔干(gàn)燥的(de)情(qíng)況，則会(huì)出(chū)現(xiàn)标(biāo)準曲(qū) 線(xiàn)不(bù)成(chéng)線(xiàn)性(xìng)，重(zhòng)複性(xìng)不(bù)好(hǎo)的(de)現(xiàn)象(xiàng)。所以(yǐ)洗闆拍干(gàn)後(hòu)應(yìng)立即 進(jìn)行下(xià)一(yī)步操作(zuò)。

• 每加一(yī)種(zhǒng)试劑前(qián)需将其(qí)搖勻。

• 反(fǎn)應(yìng)終(zhōng)止液为(wèi) 2M 硫酸(suān)，避免接觸皮(pí)肤。

• 不(bù)要(yào)使用(yòng)过(guò)了有效期(qī)的(de)试劑盒；也(yě)不(bù)要(yào)使用(yòng)过(guò)了有效期(qī)的(de) 试劑盒中(zhōng)的(de)任何试劑，摻雜使用(yòng)过(guò)了有效期(qī)的(de)试劑盒会(huì)引 起(qǐ)靈敏度(dù)的(de)降低(dī)；不(bù)要(yào)交換使用(yòng)不(bù)同(tóng)批号(hào)试劑盒中(zhōng)的(de)试劑。

• 儲存条(tiáo)件(jiàn) 保存试劑盒于(yú) 2～8℃，不(bù)要(yào)冷(lěng)凍，将不(bù)用(yòng)的(de)酶标(biāo)闆微孔闆 放(fàng)進(jìn)锡(xī)箔袋(dài)重(zhòng)新(xīn)密封(fēng)。标(biāo)準物(wù)質(zhì)和(hé)無色(sè)的(de)發(fà)色(sè)劑对(duì)光(guāng)敏 感(gǎn)，因(yīn)此(cǐ)要(yào)避免直接暴露(lù)在(zài)光(guāng)線(xiàn)下(xià)。

• 试劑變(biàn)質(zhì)的(de)迹象(xiàng) 發(fà)色(sè)试劑有任何颜色(sè)表(biǎo)明(míng)發(fà)色(sè)劑變(biàn)質(zhì)，應(yìng)當棄之(zhī)。0 标(biāo)準 的(de)吸光(guāng)度(dù)（450/630nm）值小于(yú) 0.5（A450nm<0.5）时(shí)，表(biǎo)示 试劑可(kě)能(néng)變(biàn)質(zhì)。

• 加入(rù)底物(wù)液 A 液和(hé)底物(wù)液 B 液後(hòu)，一(yī)般顯色(sè)时(shí)間(jiān)为(wèi) 15min 即可(kě)。若颜色(sè)較淺，可(kě)延长(cháng)反(fǎn)應(yìng)时(shí)間(jiān)到(dào) 20min。反(fǎn)之(zhī)，則 減短反(fǎn)應(yìng)时(shí)間(jiān)。

• 浓缩洗涤液如有結晶屬正(zhèng)常現(xiàn)象(xiàng)，請加热(rè)溶解(jiě)後(hòu)使用(yòng)。

• 該试劑盒最(zuì)佳反(fǎn)應(yìng)温(wēn)度(dù)为(wèi) 25℃，温(wēn)度(dù)过(guò)高(gāo)或(huò)过(guò)低(dī)将導致(zhì) 檢測吸光(guāng)度(dù)值和(hé)靈敏度(dù)發(fà)生(shēng)變(biàn)化(huà)。