黃曲(qū)黴毒素是(shì)一(yī)類(lèi)主(zhǔ)要(yào)由(yóu)黃曲(qū)黴菌和(hé)寄生(shēng)曲(qū)黴菌相互作(zuò)用(yòng)产生(shēng)的(de)次(cì)級代(dài)謝产物(wù)，包(bāo)括黃曲(qū)黴毒素B1(AFB1）、黃曲(qū)黴毒素B2(AFB2）、黃曲(qū)黴毒素G1(AFG1）、黃曲(qū)黴毒素G2(AFG2）、黃曲(qū)黴毒素M1(AFM1）、黃曲(qū)黴毒素M2(AFM2）等，中(zhōng)藥材中(zhōng)主(zhǔ)要(yào)含有AFB1、AFB2、AFG1、AFG24種(zhǒng)，其(qí)中(zhōng)AFB1因(yīn)其(qí)致(zhì)癌、致(zhì)畸、致(zhì)毒性(xìng)較強(qiáng)被(bèi)國(guó)際癌症研究機(jī)構（IARC）列为(wèi)Ⅰ級強(qiáng)致(zhì)癌物(wù)。

由(yóu)于(yú)中(zhōng)藥基質(zhì)複雜，以(yǐ)決明(míng)子为(wèi)例，如果(guǒ)按照藥典方(fāng)法單獨使用(yòng)免疫親和(hé)柱淨化(huà)，決明(míng)子的(de)基質(zhì)抑制效應(yìng)較大(dà)，易造成(chéng)低(dī)浓度(dù)目标(biāo)物(wù)無法檢出(chū)，從而(ér)不(bù)能(néng)对(duì)其(qí)中(zhōng)的(de)黃曲(qū)黴毒素含量(liàng)進(jìn)行準确測定(dìng)。

因(yīn)此(cǐ)，美(měi)正(zhèng)針(zhēn)对(duì)中(zhōng)藥材中(zhōng)黃曲(qū)黴毒素B1/B2/G1/G2的(de)檢測推出(chū)了新(xīn)的(de)整體(tǐ)解(jiě)決方(fāng)案(àn)。

本(běn)實(shí)验过(guò)程采用(yòng)淨化(huà)柱結合黃曲(qū)黴毒素B1/B2/G1/G2免疫親和(hé)柱方(fāng)式進(jìn)行除雜淨化(huà)，可(kě)有效降低(dī)基質(zhì)效應(yìng)的(de)影響，且(qiě)結果(guǒ)穩定(dìng)，減少(shǎo)了对(duì)儀器設備和(hé)色(sè)譜柱的(de)污染，为(wèi)客戶提(tí)供了更(gèng)高(gāo)效的(de)处理(lǐ)方(fāng)法。

方(fāng)法摘要(yào)

本(běn)實(shí)验采用(yòng)淨化(huà)柱結合黃曲(qū)黴毒素B1/B2/G1/G2免疫親和(hé)柱建立了決明(míng)子中(zhōng)黃曲(qū)黴毒素B1/B2/G1/G2的(de)前(qián)处理(lǐ)方(fāng)法。样品經(jīng)甲醇溶液提(tí)取(qǔ)，淨化(huà)柱除雜，再通(tòng)过(guò)黃曲(qū)黴毒素免疫親和(hé)柱淨化(huà)富集，LC-MS/MS檢測，外(wài)标(biāo)法進(jìn)行定(dìng)量(liàng)。結果(guǒ)表(biǎo)明(míng)，當黃曲(qū)黴毒素B1/G1添加量(liàng)为(wèi)5 μg/kg，黃曲(qū)黴毒素B2/G2添加量(liàng)为(wèi)1.5 μg/kg时(shí)，黃曲(qū)黴毒素的(de)回(huí)收(shōu)率均在(zài)90% ~ 120%。

實(shí)验流程

色(sè)譜条(tiáo)件(jiàn)

色(sè)譜柱：五(wǔ)氟苯基鍵合色(sè)譜柱（或(huò)其(qí)他(tā)等效色(sè)譜柱），2.6 µm，3.0 × 50 mm；

流動(dòng)相A：10 mmol/L乙酸(suān)铵；

流動(dòng)相B：甲醇；

柱  温(wēn)：40℃；

進(jìn)样量(liàng)：10 µL；

梯(tī)度(dù)洗脫：

液相色(sè)譜梯(tī)度(dù)洗脫条(tiáo)件(jiàn)

質(zhì)譜条(tiáo)件(jiàn)

离子源：ESI+；

霧(wù)化(huà)气(qì)：200；

電(diàn)噴霧(wù)電(diàn)壓：4500 V；

离子源温(wēn)度(dù)：275℃；

反(fǎn)吹气(qì)：80；

質(zhì)譜接口(kǒu)温(wēn)度(dù)：250℃；

采集方(fāng)式：多(duō)反(fǎn)應(yìng)監測(MRM)。

質(zhì)譜參數

實(shí)验結果(guǒ)

決明(míng)子基質(zhì)加标(biāo)回(huí)收(shōu)實(shí)验結果(guǒ)

決明(míng)子基質(zhì)5 μg/kg加标(biāo)色(sè)譜图（以(yǐ)AFT B1計(jì)）

結論

美(měi)正(zhèng)使用(yòng)淨化(huà)柱結合黃曲(qū)黴毒素B1/B2/G1/G2免疫親和(hé)柱建立了決明(míng)子中(zhōng)黃曲(qū)黴毒素B1/B2/G1/G2的(de)前(qián)处理(lǐ)方(fāng)法，並(bìng)对(duì)加标(biāo)量(liàng)为(wèi)5 μg/kg的(de)決明(míng)子样品進(jìn)行了檢測。

結果(guǒ)表(biǎo)明(míng)，先用(yòng)淨化(huà)柱除雜，再使用(yòng)黃曲(qū)黴毒素B1/B2/G1/G2免疫親和(hé)柱進(jìn)行处理(lǐ)，黃曲(qū)黴毒素B1/B2/G1/G2回(huí)收(shōu)率滿足要(yào)求且(qiě)變(biàn)异(yì)系(xì)數小于(yú)15%。

如果(guǒ)直接使用(yòng)藥典方(fāng)法，基質(zhì)效應(yìng)較大(dà)，因(yīn)此(cǐ)使用(yòng)淨化(huà)柱除雜後(hòu)再通(tòng)过(guò)免疫親和(hé)柱淨化(huà)，可(kě)有效降低(dī)基質(zhì)效應(yìng)影響，減少(shǎo)儀器設備和(hé)色(sè)譜柱的(de)污染，更(gèng)适用(yòng)于(yú)在(zài)液相色(sè)譜串联質(zhì)譜上(shàng)檢測決明(míng)子中(zhōng)黃曲(qū)黴毒素B1/B2/G1/G2，且(qiě)方(fāng)法穩定(dìng)。

附：相關(guān)产品